血清学检测,一个新冠辅助检测的“金标准” - HLA基因检测新闻
核酸检测是确诊 SARS-CoV-2 感染患者的金标准。然而单一基于核酸检测可能会出现假阴性或假阳性的情况，譬如，据王辰院士公布，SARS-CoV-2 病毒核酸检测仅有 30%-50% 的阳性率，即存在更大比例的假阴性。因待检样本的提取部位，试剂盒的灵敏度，样本抽提步骤等造成的核酸检测假阴性会使疫情防控难度加大。因此，作为辅助的检测方法之一，血清学检测进入我们的视线。
（注：本文对新型冠状病毒采用的命名是 SARS-CoV-2，而新型冠状病毒肺炎采用的命名是 COVID-19。）
01 为什么要用血清学检测？
与 SARS 患者不同，SARS-CoV-2 感染的患者存在无症状感染者，但他们也可能成为传染源。血清学检测可以帮助对疑似的轻症、无症状感染者进行排查。在 WHO 总部召开的新冠病毒研究和创新论坛上，与会者商定了一系列研究重点，其中之一就是基于血清学检测对患病人群和密切接触人群的流行病学调查研究。
了解病毒感染规模和疾病流行状态
MERS 也存在轻型和无症状感染者，为了研究其流行病学，沙特和卡塔尔分别在2015年和2019年开展研究对 10009 名和 4719 名健康人进行了 MERS-CoV 血清学检测，发现 MERS 在公众的流行率是偏低的，分别 0.15% 和 0.02%，但是高风险人群即与 MERS 患者密切接触者血清阳性率分别为 0.74% 和 3.08% 1,2。因此，鉴于 SARS-CoV-2 病毒核酸检测存在较高概率的假阴性，加上存在无症状感染者，对广泛人群和高风险人群开展血清学监测，可以了解病毒感染规模和疾病流行状态。
快速初步了解病毒来源
另外，血清学检测可以快速初步了解 SARS-CoV-2 病毒的来源。一项来自荷兰的研究对阿曼、西班牙、荷兰、智利的牛、绵羊、山羊、单峰驼和其它骆驼科动物进行血清学筛查后，发现 100% (50/50) 的阿曼单峰驼和 14% (15/105) 的西班牙单峰驼血清中含有针对 MERS-CoV 病毒 Spike 蛋白 S1 亚基抗体，这说明阿曼单峰驼普遍存在曾经/近期 MERS-CoV 或相关病毒感染 3。因此，对大量不同物种、以及不同地方的物种进行 SARS-CoV-2 病毒血清学检测可以不需要分离病毒和基因测序，即可较为快速地筛查出潜在的自然宿主、中间宿主和病毒来源地。
02 什么是血清学检测？
病毒感染后，机体产生初次体液免疫应答产生抗体 IgG、IgM或 IgA，首先，这些抗体可结合病毒表面抗原来阻止其通过和宿主细胞结合，以达到抑制病毒的效果。其次，结合了病毒的 IgG、IgA 通过 Fc 段和吞噬细胞的 FcR 结合，促进其吞噬病毒。
IgG 是血液和组织液中主要的 Ig，对抗原亲和力高；IgM 在病毒感染的初次体液免疫应答要比 IgG 早，但对抗原亲和力弱；IgA 分布于血液和黏膜，在黏膜局部（如呼吸道上皮等）免疫中起了重要的作用。
一般来说，经潜伏期后，抗体水平呈指数增高，而后经平台期，最后由于抗体被降解或与抗原结合而被机体清除，抗体水平下降（图1）。IgM 抗体一般在感染早期出现，后期产生 IgG 抗体。理论上，在血清中检测到 SARS-CoV-2 特异性抗体即可明确个体近期或曾经感染了该病毒。
图1 SARS 患者血清中抗SARS-CoV nucleocapsid蛋白IgA、IgM和IgG模式
03 血清学检测有哪些方法？
病毒感染的血清学检测大多使用三类方法：间接免疫荧光（IIFT）、间接法 ELISA 和胶体金法。三者原理、判读阳性的标准、优缺点详见下表、图2。
间接免疫荧光（IIFT）、间接法 ELISA
图2 病毒血清学检测 IIFT 法和 ELISA 法原理图
胶体金法
可能大家对胶体金法原理有点陌生，胶体金法就是我们常说的试纸条，它基于胶体金免疫层析技术，可以体外定性检测人血清、血浆或全血中的病毒特异性 IgM/IgG 抗体。该方法将重组的病毒蛋白以条带状固定在膜上（检测线），胶体金标记二抗吸附在结合垫上。检测时待检样本加到试纸条一端的样本垫，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的金标二抗并与之相互作用，然后移动到检测线，当样本中含有病毒特异性 IgM/IgG 抗体时，一抗二抗复合物与病毒蛋白发生特异性结合而被截留，聚集在检测线上，产生肉眼可见的显色条带（图3）。
图3 胶体金法检测病毒特异性 IgG/IgM 原理图
04 血清学检测阳性就一定是感染了/过病毒？
不一定，血清学检测冠状病毒感染并不能像病毒核酸检测阳性一样作为病毒感染的“金标准”！因为抗体检测的准确性受制于检测方法、灵敏度、特异性、血样制备等因素，且 ELISA 法检测结果通常还需要进一步的中和抗体测试等严格验证 2,5。
值得注意的是，同样的血清样本用 ELISA 和 IIFT 平行比较，测出的血清转换时间可能偏差会非常大4。还会出现 IIFT 检测阳性，但是 ELISA 检测阴性，或者反过来4,6。而方法中包被病毒蛋白的选择、病毒蛋白重组表达的条件、包被缓冲液、与同源性较高的病毒产生交叉反应以及试剂品质高低都会影响血清学检测的特异性和灵敏度2,7。
05 COVID-19 血清学检测试剂盒开发进展如何？
据央视新闻消息报道，钟南山院士指导研发出了 IgM 抗体快速检测试剂盒，采一滴血 15 分钟内可出结果。而丽珠集团（子公司丽珠试剂与武汉病毒所合作）、广州达瑞分别通过公司公告和互动平台声称成功研发出了“胶体金法”及“酶联免疫法”新型冠状病毒 IgG、IgM 抗体检测试剂盒。另据媒体报道，深圳大学和深圳市第三人民医院及深圳市天深医疗器械有限公司成功研发出了化学发光检测试剂盒，但截止到目前还没有血清学检测试剂盒被国家审批上市应用于临床检测。
声明：转载此文是出于传递更多信息之目的。若有来源标注错误或侵犯了您的合法权益，请作者持权属证明与本网联系，我们将及时更正、删除，谢谢。 邮箱地址：2513零1765#qq.com
==========================================================
您可能喜欢的内容
==========================================================
泌尿生殖道病原体核酸（RNA）检测 - HLA基因检测新闻
一、他们是什么？这4个家伙分别是 沙眼衣原体（CT）淋病奈瑟菌（NG）解脲脲原体（UU）生殖支原体（MG）；CT/NG/UU/MG均是泌尿生殖道感染常见病原体，其中：①淋病奈瑟菌（NG）引起的泌尿生殖系统化脓性感染，是常见的性传播疾病之一；可引发男性淋菌性尿道炎、女性淋菌性尿道炎和宫颈炎②非淋菌性尿道炎(NGU)则与支原体、衣原体相关。二、筛查推荐l美国疾控中心(US CDC)、美国预防服务工作组(USPSTF) 、英国国家临床最优化研究所(NICE)指南均推荐所有育龄人群中进行CT或NG检查；l中国2014版 《梅毒、淋病、生殖器疱疹、生殖道沙眼衣原体感染诊疗指南》 推荐采取SAT方法检测病原体RNA；lRNA方法检测较传统培养，DNA检测方法，在保证灵敏度高，不易漏检的同时，可有效区分死菌或活菌（可进行疗效评估和 ...
2019检测机构报告出炉！三大区域检测机构营收占比超80% - HLA基因检测新闻
截至2019年底，我国共有检验检测机构44007家，2019全年实现营业收入3225.09亿元。 从检测机构区域分布来看，华东地区占比27.49%，华北地区占比17.43%，中南地区占比24.29%，三大区域占比合计69.21%。从省份分布来看，山东、广东和江苏检测机构数量排名前三。 从检测机构营业收入的区域比重来看，华东地区占比35.58%、华北地区占比17.85%、中南地区占比26.71%，三大区域占比合计80.14%。从省份分布来看，广东、上海和江苏检测机构营业收入排名前三。 检验检测机构数量及检验检测市场规模同步增长 2015-2019年，我国检测行业持续扩容，根据国家市场监管总局统计，截至2019年底，我国境内(不含港澳台)检验检测服务业共有检验检测机构44007家，较2018年增长11.49% ...
总磷检测的注意事项 - HLA基因检测新闻
二代COD氨氮总磷总氮检测仪测定总磷用的是国标的钼氨酸法。今天我给大家讲解一下总磷检测时需要注意的一些事项：1.总磷很容易吸附在塑料瓶上，因此我们采样时尽可能的是用玻璃瓶，而且取样需要是现取现用，如果不能及时检测应该用硫酸酸化至水样PH小于2，检测前需要调节PH至中性；2.总磷试剂B为抗坏血酸。一定要保存在4度左右的冰箱里，否则会失效，判断的依据是试剂的颜色，变黄说明试剂失效，而且在加入试剂前试管必须完全冷却下来；3.检测的水样消解后必须要澄清，如果水样消解后有颜色说明干扰比较大；我们的仪器的处理方法就是稀释水样，有条件的可以做色度补偿；4.加入显色剂后要注意控制显色时间，15分钟为好；夏天温度在25度以上显色10分钟左右，冬天温度低可以在20-30度水浴加热显色，尽量控制在15分钟左右；显色时间过长总磷的值会下降。 ...
我国现行真菌毒素检测标准概述 - HLA基因检测新闻
1 真菌毒素标准的发展 真菌毒素是产毒真菌在粮食（或果蔬）的种植、收获、运输、储存过程中侵染粮食（或果蔬），并在适宜的生长条件下产生的次生代谢产物。真菌毒素污染谷物、饲料、果蔬，通过食物链危害人类健康和畜禽生产安全。因此，世界卫生组织（World Health Organization，WHO）和联合国粮农组织（Food and Agriculture Organization，FAO）把真菌毒素列为食源性疾病的三大根源之首。我国是真菌毒素污染最严重的国家之一。 目前，人们发现的真菌毒素有400多种。我国重点关注黄曲霉毒素（主要是Aflatoxin B1，AFB1和Aflatoxin M1，AFM1）、脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol，DON）、玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）、赭曲 ...
新冠病毒核酸检测原理是什么 - HLA基因检测新闻
核酸检测的物质是病毒的核酸。核酸检测是查找患者的呼吸道标本、血液或粪便中是否存在外来入侵的病毒的核酸，来确定是否被新冠病毒感染。因此一旦检测为核酸“阳性”，即可证明患者体内有病毒存在。 新冠病毒感染人体之后，首先会在呼吸道系统中进行繁殖，因此可以通过检测痰液、鼻咽拭子中的病毒核酸判断人体是否感染病毒。所以说，核酸检测阳性可以作为新型冠状病毒感染确诊的新标准。 检测新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR（聚合酶链式反应）。因PCR反应模板仅为DNA，因此在进行PCR反应前，应将新型冠状病毒核酸（RNA）逆转录为DNA。在PCR反应体系中，包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸 ...
一文详解pdl1检测 - HLA基因检测新闻
在今年NCCN指南中明确提出对于无明确驱动基因突变的初诊的晚期NSCLC肺癌患者可以进行PD-L1的检测，如果PD-L1表达≥50%，初始治疗可以选择PD-1单抗Keytruda用药。基于其较化疗优越的临床生存优势及较少的不良反应。很多医生及患者朋友们也意识到，一线使用Keytruda重点在筛查相应人群，而PD-L1表达≥50%的人群占整体晚期NSCLC的27%左右。那PD-L1检测如何去做呢？ 自肺癌治疗格局改变后，免疫治疗作为一种新的治疗方法逐渐被大家所认知。每天关于免疫治疗的知识更新也在不断传播。但当这一治疗落实到临床实践中时，就提出了很多的问题。今日我们就近期很多患者提到的PD-L1的检测进行简单的解析。 在今年NCCN指南中明确提出对于无明确驱动基因突变的初诊的晚期NSCLC肺癌患者可以进行PD-L ...
马上开始检测，获得精准资料
免费获取方案 →