HLA-B27基因属于Ⅰ型MHC基因，表达在机体中所有有核的细胞上，尤其是淋巴细胞的表面有丰富的含量
HLA-B27基因属于Ⅰ型MHC基因,表达在机体中所有有核的细胞上,尤其是淋巴细胞的表面有丰富的含量
随着网络及媒体的发展,强直性脊柱炎(AS)也越来越多地出现在我们的视野中。从一些著名的演艺明星,到一些普通的患者,都在经历着病痛的折磨。HLA-B27(人类白细胞抗原B27),是强直性脊柱炎(AS)实验室检查的重要指标,在强直性脊柱炎患者中阳性率高达90%。今天,我们从检验医学的角度谈一下,HLA-B27检测的方法学区别以及其临床意义。
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HLA-B27基因属于Ⅰ型MHC基因,表达在机体中所有有核的细胞上,尤其是淋巴细胞的表面有丰富的含量。我们根据HLA的特点,可以进行血清学、细胞学和分子生物学的分型。根据它的表达特点,用于临床上的检测HLA-B27的常见方法包括微量淋巴细胞毒法(complement dependent cytotoxity , CDC)、双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)、磁珠酶联免疫分析法(IMS-ELISA)、流式细胞仪分析法(FCM)、聚合酶链反应-序列特异性引物法(PCR-SSP)以及实时荧光PCR(RT-PCR)法等,下面我们慢慢分析:
01微量淋巴细胞毒试验(CDC )
应用已知抗HLA的特异性标准分型血清与待测淋巴细胞混合,在补体的参与下可以使携带与分型血清型相同抗原的淋巴细胞死亡,判定被检者HLA型别的一种方法。
优点:不需要特殊的仪器,易于操作,一般实验室都可开展。
缺点:影响因素比较多,如细胞纯度、补体的活性和差异、抗体的纯度和效价、HLA的高度多态性、细胞表面B27抗原分子表达数目及抗原交叉性、操作者的主观影响等,容易造成假阳性和假阴性的结果。
02酶联免疫吸附试验(ELISA)
应用纯化的B27抗体包被微孔板,依次加入HLA-B27抗原(待测样本)、生物素化的抗HLA-B27抗体、HRP标记的亲和素,形成双抗体夹心反应,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,在终止液的作用下最终化为黄色,颜色的深浅和样本中的HLA-B27呈正相关。
优点:其结果与CDC检测符合率为99%,且不受感染因素影响,重复性好。
缺点:准确度相对偏低,容易误诊、漏诊。
03磁珠酶联免疫分析法(IMS-ELISA)
通过经HLA-B27抗体包被的磁珠分离全血中带有HLA-B27抗原的白细胞,同时以CD45-辣根过氧化物酶结合体来标示全血中的白细胞,最后经四甲基联苯胺显色而测定其结果。
优点:操作简便,反应时间短,对标本新鲜度要求不高(2-8°C静置一周内都可),需要样本量少,结果客观。
缺点:不适合大批量操作。
04流式细胞仪分析法(FCM)
利用荧光标记的HLA-B27单克隆抗体,与细胞表面的B27抗原结合,使结合后的淋巴细胞有一定的荧光强度,由流式细胞仪测得的通道值来反映,以其值的高低判断HLA-B27抗原表达的百分比,从而判断HLA-B27的阴阳性。
优点:全自动仪器检测,克服了人为误差,重复性高,结果判断准确,为目前最理想的方法;
缺点:仪器昂贵,成本较高,只适合较大医院应用,而且荧光易淬灭。与HLA-B7抗原有一定的交叉反应,容易出现假阳性。
05聚合酶链反应-序列特异性引物法(PCR-SSP)
通过设计基因序列特异的引物SSP,对待测DNA进行PCR扩增,从而获得HLA型别特异性的扩增产物。
优点:标本不受时间限制,陈旧血、冷冻血也可用于DNA的提取;DNA可长期保存以供复核或送其他实验室验证;技术成熟,判断结果客观准确,特异性强,灵敏度高,稳定性好。
缺点:PCR-SSP检测的是HLA-B27的基因型,携带B27基因并不等于细胞表面一定有HLA-B27抗原的表达。检测HLA-B27抗原的表达即其表型,或许对临床更有意义。
06实时荧光PCR法(RT-PCR)
在PCR反应液加入荧光染料,该染料能与双链DNA特异性结合,通过实时检测反应体系荧光信号强度,达到检测PCR扩增产物的目的。
优点:直接检测HLA-B27抗原的编码基因,不会与HLA-B7产生交叉反应,能准确的作出判断。
缺点:和PCR-SSP的缺点一样,而且操作需要成本高,需要有专业的实验室及人员。
6种方法在敏感性、特异性方面的对比:
通过对HLA-B27的检测方法的分析,我们发现由于每种方法的特异性和敏感性的差异,有的方法学存在假阳性或假阴性的结果。每家医院检测的方法不一样,得到的结果也会不一样。和临床医生、病人在沟通的时候,我们也可以建议再用第三种方法检测,以确证结果的准确性。也希望在未来,有更快捷、便宜、方便、合适、准确的方法问世,为病人、临床服务!
参考文献
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